Immunchemie (ICH)
Dozentin: Prof. Dr. Roswitha Stenzel
Semester: 6BCB
Vorlesung ( 6SWS) mit Praktikum (4SWS)
Contents:
1. Introduction to the immune system
2. Cells involved in the immune response
3. The lymphoid system
4. B-cells, antibodies and antigen recognition
5. Complement system
6. Generation of antibody-diversity
7. Production of polyclonal, monoclonal, recombinant antibodies, antibody fragments
and clinical application
8. Synthesis of hapten-carrier-conjugates
8.1 Strategy of chemical conjugation
8.2 Sodiumperiodate method
8.3 Activation of Carboxylgroups by NHS and CDI
8.4 Crosslinking agents
9. Immunoassays
9.1 Heterogeneous Immunoassays
9.1.1 ELISA
9.1.1.1 Test principles
9.1.1.2 Different enzymes and substrates
9.1.1.3 Biotin/streptavidin
9.1.1.4 ELECSYS
9.2 Homogeneous immunoassays
9.2.1 Turbidimetric immunoassays
9.2.2 FPIA
10. Synthesis of tracers
10.1 Antibody-enzyme conjugates
10.2 Antibody-dye conjugates
10.3 Biotinylation reactions
10.4 Iodination reactions
11. Other immunoanalytical methods
11.1 Pregnancy test
11.2 Surface plasmon resonance
Es gibt keine Überschneidung mit der Immunology-Vorlesung im Master-Studiengang!
ICP für 6. Semester BCB (4SWS, Blockpraktikum in den Semesterferien, meistens Mitte Februar und Mitte September, Termin auf der Homepage nachsehen)
1. a) Blutausstrich mit eigenem Blut und Identifizierung der Leukozyten
b) Blutgruppenbestimmung
2. Nachweis von IgG aus Humanplasma mit ELISA
3. Verdau von IgG mit Proteasen, anschließend SDS-PAGE und Westernblot mit Biotin-Streptavidin
4. Isolierung von IgG aus Humanplasma mit Protein G-Säule (Affinitätschromatografie und magnetischen Mikropartikeln), Kontrolle der Reinheit mit SDS-PAGE (Gradientengel), Proteinbestimmung zur Ausbeuteberechung mit Bradford und ELISA.
5. Markierung von IgG (unmarkierter 2. Ak aus ELISA) mit Peroxidase, Kontrolle der IgG-Aktivität und der Kopplung durch Dot-Blot
6. Markierung von Albumin mit Fluoreszein-5-Maleimid, Nachweis und Quantifizierung durch Messung der Absorption
7. Markierung von Albumin mit Sulfo-NHS-LC-Biotin, Nachweis durch Dot-Blot
8. Immunochromatographischer Teststreifen zur Detektion von Humanserumalbumin (HSA)